十三、HIV检测方法详细总结:
HIV抗体检测
HIV抗体检测试验分为筛查试验(包括初筛和复检)和确认试验。
检测抗-HIV抗体是HIV/AIDS诊断的一项重要指标,也是控制HIV传播和AIDS流行的重要手段。抗-HIV抗体测定作为血清学诊断要求准确、可靠,故必须经筛查、复检试验和确认实验三个步骤。
初筛实验方法主要有:
酶联免疫试验(ELISA)、化学发光试验、明胶颗粒凝集试验(PA)、免疫层析试验、核酸检测等。确认试验主要有:
免疫印迹试验(Western blot, WB)、免疫荧光试验(IFA)。
快速检测试验(RT)
明胶颗粒凝集 (Particle Agglutination, PA)
免疫渗漏 (Immunoconcentration, Flow through, FT)
免疫层析 (Immunochromatograpy, lateral flow, IF)
* 用最新快速HIV试剂检测HIV抗体比第三代EIA晚2-8天
目前在国内批准注册的国外进口试剂有:Determine HIV1/2(ABBOTT,雅培)、韩国SD、麦美华、中新科炬等。
一般10-30min内出结果,超过60min判断结果无效。
2003年国内已有产品被批准,万泰、科华、艾康等
明胶颗粒凝集试验(PA)
PA是一种简便的HIV血清抗体检测方法。先将样品稀释,然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒,混匀后保温(一般为室温)2H,观察结果。
操作简便,无需特殊仪器设备,适合对少量标本的检测。血清中有HIV抗体存在时,经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。
HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂(AFD HIV 1/2 PA),可用于HIV1/2的筛查.
HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂(AERODIA-HIV-1/2)可用于区分HIV-1型和HIV-2型。
缺点:判定结果用肉眼观察,结果无法保存。
目前为了保存试验结果,有条件的实验室可配备数码相机,记录每次试验结果。
胶体硒法(免疫层析法)
在使用试剂前必须仔细阅读说明书,需严格按照说明书执行,否则无法保证可靠的结果
原理:以硝酸纤维膜(玻璃纤维膜)为载体。
是一种用免疫层析法定性测定血样中HIV1/2抗体,加样本入反应条,当样品迁移通过结合物包被处,与硒胶体-抗原结合物重组结合,此混合物继续迁移通过固相包被的合成肽和重组抗原的病人结果窗口。
如果样品中含有HIV1/2抗体,抗体将会与硒胶体-抗原结合,并在病人窗口处被固相包被的合成肽和重组抗原所捕捉固定,形成一条红线;
如果样品中不含有HIV1/2抗体,硒胶体-抗原结合物将会通过病人窗口而不与固相包被的合
样品垫: 加入血浆,血清或全血样品.红细胞在此迁移过程中被去除
接物垫:含分析特异性试剂结合的硒标,为一种肉眼可见的红色信号,被分析物和硒标特异性试剂在此反应结合
病人条:固定的含特异性分析试剂,任何与硒标特异性试剂结合的分析复合物在此被结合固定,形成三文治结合物,肉眼可见的红色线条说明有阳性反应


质控条:固定的含捕捉硒标物的特异性试剂,不管样品中有无被检测物都应出现红色线条.控制测试结果的有效性
对筛查试验结果的解释
筛查实验的目的是检出所有的阳性者,在得到一个筛查试验阳性结果时,要想到它极有可能是真正的阳性,但也有假阳性的可能
出现假阳性的原因很多,如风湿病、病毒性肝炎、大量溶血的样品、不用EDTA抗凝的全血血浆样品等
筛查试验结果的报告
呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告
所有筛查试验阳性的标都应进行复检