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高通量测序技术综述摘要：高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（"Next-generation"sequencing technology），以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。同时，高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(deepsequencing) 关键字：高通量测序深度测序新一代测序应用正文：一、测序技术发展现状根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序（MassivelyParallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆（Polony Sequencing）、454焦磷酸测序（454 pyrosequencing）、Illumina(Solexa)sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序（Ion semiconductor sequencing）、DNA纳米球测序（DNA nanoballsequencing）等。随着第二代测序技术的迅猛发展，科学界也开始越来越多地应用第二代测序技术来解决生物学问题。比如在基因组水平上对还没有参考序列的物种进行重头测序（de novosequencing），获得该物种的参考序列，为后续研究和分子育种奠定基础；对有参考序列的物种，进行全基因组重测序（resequencing），在全基因组水平上扫描并检测突变位点，发现个体差异的分子基础。在转录组水平上进行全转录组测序（wholetranscriptome resequencing），从而开展可变剪接、编码序列单核苷酸多态性（cSNP）等研究；或者进行小分子RNA测序（small RNAsequencing），通过分离特定大小的RNA分子进行测序，从而发现新的microRNA分子。在转录组水平上，与染色质免疫共沉淀（ChIP）和甲基化DNA免疫共沉淀（MeDIP）技术相结合，从而检测出与特定转录因子结合的DNA区域和基因组上的甲基化位点。二、高通量测序技术的应用测序技术推进科学研究的发展。随着第二代测序技术的迅猛发展，科学界也开始越来越多地应用第二代测序技术来解决生物学问题。比如在基因组水平上对还没有参考序列的物种进行重头测序（de novosequencing），获得该物种的参考序列，为后续研究和分子育种奠定基础；对有参考序列的物种，进行全基因组重测序（resequencing），在全基因组水平上扫描并检测突变位点，发现个体差异的分子基础。在转录组水平上进行全转录组测序（whole transcriptomeresequencing），从而开展可变剪接、编码序列单核苷酸多态性（cSNP）等研究；或者进行小分子RNA测序（small RNA sequencing），通过分离特定大小的RNA分子进行测序，从而发现新的microRNA分子。在转录组水平上，与染色质免疫共沉淀（ChIP）和甲基化DNA免疫共沉淀（MeDIP）技术相结合，从而检测出与特定转录因子结合的DNA区域和基因组上的甲基化位点。需要特别指出的是第二代测序结合微阵列技术而衍生出来的应用--目标序列捕获测序技术（Targeted Resequencing）。这项技术首先利用微阵列技术合成大量寡核苷酸探针，这些寡核苷酸探针能够与基因组上的特定区域互补结合，从而富集到特定区段，然后用第二代测序技术对这些区段进行测序。目前提供序列捕获的厂家有Agilent和Nimblegen，应用最多的是人全外显子组捕获测序。科学家们目前认为外显子组测序比全基因组重测序更有优势，不仅仅是费用较低，更是因为外显子组测序的数据分析计算量较小，与生物学表型结合更为直接。目前，高通量测序开始广泛应用于寻找疾病的候选基因上。内梅亨大学的研究人员使用这种方法鉴定出Schinzel-Giedion 综合征中的致病突变，Schinzel-Giedion综合征是一种导致严重的智力缺陷、肿瘤高发以及多种先天性畸形的罕见病。他们使用AgilentSureSelect序列捕获和SOLiD对四位患者的外显子组进行测序，平均覆盖度为43倍，读长为50 nt，每个个体产生了2.7-3GB可作图的序列数据。他们聚焦于全部四位患者都携带变异体的12个基因，最终将候选基因缩小至1个。而贝勒医学院基因组测序中心也计划对15种以上疾病进行研究，包括脑癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、心脏病、糖尿病、自闭症以及其他遗传疾病，以更好地理解致病突变以及突变对疾病的影响。前不久刚刚结束的Science杂志年度十大科学突破评选中，外显子组测序名列其中。三、测序技术总结与展望第一代测序技术凭借其长的序列片段和高的准确率，适合对新物种进行基因组长距框架的搭建以及后期GAP填补，但是成本昂贵，而且难以胜任微量DNA样品的测序工作。第二代测序技术中，454序列片段最长，比较适合对未知基因组从头测序，搭建主体结构，但是在判断连续单碱基重复区时准确度不高。Solexa较454具有通量高、片段短、价位低的特点，可以用于大基因组和小基因组的测序和重测序。Solexa双末端测序(paired-end sequencing)可以为基因组进一步拼接提供定位信息，但是随着反应轮数增加，序列长度和质量均有所下降，而且在阅读AT区时有明显错误倾向。SOLiD基于双碱基编码系统的纠错能力以及较高的测序通量，适合转录本研究以及比较基因组学特别是SNP检测等，但是测序的片段短限制了该技术在基因组拼接中的广泛应用。第三代测序技术目前正在研发阶段，尚未正式投入使用。参考文献：论文《新一代测序技术的发展及应用前景》，中山大学生科院，《生物技术通报》2010年第10期论文《新一代高通量测序技术临床应用前景》，《广东医学》，2010 论文《高通量测序技术及其在微生物研究中的应用》，《微生物学报》，2011.04 综述《新一代测序-高通量技术》，生物谷，2010，03

测序平台设备公司 Apply Biosystems(ABI) 基于磁珠的大规模并行克隆连接DNA测序法美国Agencourt私人基因组学公司（APG）上市公司：销售设备和试剂获取利润 Illumina 合成测序法英国Solexa公司首席科学家David Bentley 上市公司：销售设备和试剂获取利润 Roche 大规模并行焦磷酸合成测序法美国454 Life Sciences公司的创始人Jonathan Rothberg 上市公司：销售设备和试剂获取利润，该产品已经于2013年停产。 Helicos 大规模并行单分子合成测序法美国斯坦福大学生物工程学家Stephen Quake 上市公司：2007年5月首次公开募股（IPO）（P.S.由于该平台准确率太低等原因，该公司已于2012年宣告破产） Complete Genomics DNA纳米阵列与组合探针锚定连接测序法美国Complete Genomics公司首席科学家radoje drmanac 私人公司：投资额为4650万美元，该公司于2013年被华大基因收购。

高通量测序的实验流程 1.样本准备（sample fragmentation）其中RNA检测需要干冰保存 2.文库构建(library preparation)选择适合的平台最为重要 3.测序反应(sequencing reaction) 4.数据分析(data analysis)优先选择拥有测序平台，拥有自己的分析团队的公司。信息挖掘

高通量测序的解释根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序（Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆（Polony Sequencing）、454焦磷酸测序（454 pyrosequencing）、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序（Ion semiconductor sequencing）、DNA 纳米球测序（DNA nanoball sequencing）等。高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变，一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing)足见其划时代的改变，同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(deep sequencing)。

高通量测序交流群190438113 高通量测序交流群，群号：190438113 实验设计分析交流群，实验相关文献资料群，我们的目标是在大数据时代，运用前沿的技术做优质的科研课题，有兴趣的朋友有经验的朋友欢迎加入提问或者提供解答探讨！

从这场游戏开头重新看了一遍，对于这个说明你们怎么看？祭度娘

给阿德里克盖个楼吧大帅的命运大家都清楚的，但是真的走的很突然，也很憋屈，他就像夏亚的父亲，可惜却不是他女儿的好父亲，唯一的私心却也不被接受，他注定是夏亚猎国的导火索，只有燃尽他才能点燃夏亚的大火。唉，好多话想说，还是认真盖楼了。。。

无聊等更转载，消遣文伊甸园之奴宠战记

上午考完行测的飘过，表示无压力… 下午裸上~

三天两更进化成两天一更，难道下面是五天两更吗？无奈，无言，狗狗滚蛋

推荐一个很不错的小说，看过的觉得不错的顶一个刀剑神域，我在看动画版，超赞，有没有认同的？

携锡壶，游西湖，锡壶掉入西湖，惜乎锡湖。这个是绝对吗？如题，求指导

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求教会刷钻的有人会刷钻吗？？谁给教下行吗？？发邮箱也行[email protected]感谢

跳舞消失了？多久没更新了？他病恶化了？

更新？我笑了洗洗睡吧，晚上看书伤眼，还影响睡眠，失望时生气伤肝，去看看猎国，四个月更新两章哩，再看凡人！小意思，你慢慢更，反正后期一定是跑跑大乘，跑跑飞升…本来嘛，这类小说最大悲剧就是猪脚一定会不断修为提升，作者不太监，不烂尾，猪脚就会继续强下去

看完更新的猜测大家点评一下凤歌更新了，果断顶起，本来说要戒掉小说的，看到山海经，唉，老衲不得不破戒了，看完首先要猜测时间，为什么？？兄弟，这是经啊经啊按照山海的前路，经应该是后续的我还想知道陆渐和姚大美人的后面故事呢，更想知道笑面虎谷缜和他的傻鱼的故事呢，额不知道是谁的去补习去。。。言归正传首先时间我猜测是明末，也就是挨着沧海的时间段，为什么，在定远侯三个字，什么是定远侯？1.东汉班超的封号。班超早年家贫，为官佣书，尝投笔叹曰:"大丈夫无它志略，犹当效傅介子、张骞立功异域，以取封侯，安能久事笔研闲乎？"后奉使西域，立功，封定远侯。　　事见《后汉书．班超传》。唐王昌龄《箜篌引》:"何用班超定远侯，史臣书之得已不?" 　　后亦喻称驻守或出使西北边疆地区的使者、大臣等。定远，今陕西镇巴县，位于陕西南部，与四川接壤。所以地点是四川附近，有人问了，定远侯就是明代吗？？据我所查，清朝没有侯，驻守边关的多为藩王，所以我猜测此卷时间和沧海很近，甚至可能近到，陆渐谷缜不再是传说，而是NPC的存在，我是文盲，我无敌~~说的不对请指教~~~

剧情猜测：噬金虫VS噬魔蚁跑跑就是跑跑，即使一时霸气外露，杀人越货也一定是为了继续跑，我猜跑跑跑出去是靠小金们，而且弄不好就出现个虫王，因为有魔气和灵力的会被耗死，但是小金们是靠吃可以以战养战，不知大家怎么想

如果小茹进后宫… 他哥会不会便当啊？

去看看猎国培养自己等更的耐性，半个月没更新了，还不是都。。。还不是都活着，也没催的了，也没什么吵的，一句话有更就看没有就干活去都快过你年了做点事去别天天拿个电脑不动举着个手机伤眼，祝大家新春快乐，别沉迷啊

半个月了。。。土憋真是太憋了

有个问题请教大家，请指教巫神女是神玄四重对吧？？那她年龄要多少了？？额，大家都说她要被收入后宫，我也有点同感。。可是修为提升就算再变态估计也不会和猥琐一样了吧，就算传说中的世家再牛，也不能都砸她一人身上吧，如果真的砸她一人身上，那她的年龄也不小了吧，猥琐会不会收了个老御姐啊？？也许是我看书不仔细，请大家指教

其实凤姐充气娃娃… 也可以卖可以送给你讨厌的男的

顶雷猜测这个娘娘腔会成猥琐搭档，和三皇的那个估计要么不熟，要么关系不好，不对那就没辙了～

不错了，你看看猎国，那是周刊如题

没人更新？？？？？？

断更几天了？如题…

我猜明宁没死～他不能死啊，这么简单就便当，那猥琐岂不太容易了，修舍利也没意义强调一下嘛

狮子干嘛去了？话说这场战争难道又没有狮子吗？那狮子可不是一般的将领啊！打酱油？

居然不播… 同学去香港，那里电视播放美国华尔街抗议民众（不是中国人）披着中国国旗脸上化妆画着中国国旗，中国大陆居然不播放…

今晚更新吗？既然他在现场…那今晚无更吧？谁在现场？帮问问？

谁更新啊谁更新更新啊更新

关于魔界那个女的那个有点迷茫的会不会是南宫啊？你想啊，空间位点少的可怜，能正常安然飞升的就剩魔界了，按理说南宫再不飞就悲剧了，而且老魔留下过魔功的功法

做一个猜想，求鉴定地精之神是个人妖，被土鳖花言巧语所骗，误以为土鳖救他（她），因为土鳖的武器，外加他（她）出生没多久，能力高，智商低，学习能力强，把土鳖当了父母？然后达尔爆发，夺回身体，又被神所制，当了土鳖坐骑，大家觉得有没有可能？或者哪部分有可能？

那个男的感觉会是便当啊估计会被阿几杀了。。那个收养龙凤胎弟弟的男人感觉和他老婆会被阿几杀掉的样子。。。原因一这种收养人被杀被收养人感情升华发誓报仇的剧情前奏貌似都是这样小感动。。。原因二貌似主角的亲人谁收养谁要悲剧。。。。

下一个高潮… 你们说这所谓的下一个高潮是把阴丽花推倒还是把水灵儿推倒啊？

这是与鸟人最后接触了吧？如果是最后接触，会不会雷兰被收成花瓶啊？感觉劳模后宫不多，花瓶多的要命。

夏亚他们遇到了神？他们是不是碰到地精的真神了？毕竟这货还没露头吧？曼德拉貌似不是神，神应该和他的那个剑有关

姬雅我想对你说…… 姬雅，当时姓林的不知激发了不知什么东西，灵儿控制不住自己的灵气，我为了救她，只好吸干她的真元，才逃过此劫，但是如此相当于废去了她的修为，而她为了救我背叛了师门，我一开始不知她是女的以为是个娘娘腔，这也就没什么了大不了菊花献给他就是了，可是她没了真元就解除了伪装，为了吸干真元必须推倒了她，我是男人，无罪的男人，推倒一个必须负责，这才能完成通天之路的传统～所以我要对他负责，所以请你原谅并且帮助我让广大读者道友盯紧无罪，不要让他使我的灵儿被推倒的难度增加，最好还能顺手让我解决许千幻，还有三皇门那个小受，拿到符和水印送给灵儿，再在帮她时把那半个水灵根弄好，再让黑水莲玄阶上等。我就知足啦，我就怕无罪坑杀了灵儿…还有怕诸位看到的道友不为我知道太多而粉我，那我太亏了

看了视频我啥也不想说了。。。。没看过真实动画。。。如果。。。我是说如果那个视频是真的。。。我想我非得笑喷了，真心扛不住，虽然小时候很喜欢火车侠，也理解制作方没打算让我们看，只打算给00后们看或者10后们看。。。反正，没看过火车侠的一定没觉得高铁侠和岛国的类似。。。不过，额，我真心可以不在意他的相似度有多高，不过。。。那个。。。我发觉我真的看不下去3D混着2D的动画，看完以后那叫一个郁闷啊，有种我宁可看2D的机器猫，也不想看国产2D加3D的高达。。。摆出个姿势都是那么的蛋疼。。。这是给00后们往什么方向引到啊。。。再说剧情，雷同就雷同吧，其实雷同的东西多得很，没必要这么较真，用我一直在看的柯南来说，最开始的一些剧情，还不是和咱们明代的《二刻拍案惊奇》之类的书有一样的地方，甚至一些案例就被照用了，大家还不是很喜欢，为啥，你想啊，一帮小孩子，谁那么较真，这个是不是照抄啊，只看有没有意思呗。大家觉得是这个理吧，再说了现在若干动画都快成量产了，量产后宫，量产机器人，国产动画，敢做点以前没做过的，我知足了，就希望以后，能看到国产后宫动漫，它就是真的翻译版，我也看。当然照搬归照搬，一些神作能不糟蹋就别糟蹋了。。。伤人心啊。。。。说的不对别喷我，大家有理说理。。。

基因工程第一章绪论 1、基因：就是存在于DNA上承载遗传信息的核苷酸序列，是位于染色体上呈直线排列的遗传物质的最小单位，也是携带遗传信息的结构单位和控制遗传性状的功能单位。 2、基因工程：又称重组DNA技术，分子水平进行遗传操作，将任何生物体（供体）的基因或基因组提出来，或通过人工合成的目的基因，按照先设置好的蓝图，插入质粒或病毒复制子（载体），而形成一杂合分子（DNA重组体），然后将重组体转移到复制子所属的宿主生物体复制，或转移到另一生物体（受体）的细胞内（原核或真核），使之在受体细胞内遗传并使受体细胞获得新的性状。 3、基因工程的三要素：供体、载体、受体 4、基因工程的基本流程：（1）DNA的制备包括从供体生物的基因组分离或人工合成，以获得带有目的基因的DNA片段。（2）在体外通过限制性核酸内切酶分别分离得到的外源DNA和载体分子进行定点切割，使之片段化或线性化（3）在体外将含有外源基因的不同来源的DNA片段通过DNA连接酶到载体分子上，构建重组DNA分子。（4）将重组DNA分子通过一定的方法引入到受体细胞进行扩增和表达，从培养细胞中获得大量细胞繁殖群体。（5）筛选和鉴定转化细胞，剔除非必需重组体，获得引入的外源基因稳定高效表达的基因工程菌或细胞，即将所需要的阳性克隆挑选出来。（6）将选出的细胞克隆的基因进一步分研究，并设法使之实现功能蛋白的表达。

市场营销 1市场营销；是个人和组织通过创造并同他人交换价值产品以满足需求和欲望的一种社会性经营管理活动。 2需要：指人所缺乏的，无法创造和没得到某些基本满足的感受状态。 3欲望：由个人文化背景及生活环境的陶冶所表现出的对基本需要的特定追求。 4需求：指有能力并愿意购买某个产品的欲望。 5效用：消费者在购买和使用产品时，对其功能传递的评价效度。 6满意：指顾客对一个产品的可感知的效果与他的期望值相比较后，所形成的愉悦或失望的感觉状况。 7成本：消费者购买产品所付出的金钱，时间，精神和体力。 8市场：一切具有特定的欲望和需求并且愿意和能够以交换来满足此欲望和需求的潜在顾客组成。 9市场营销观念：1传统市场营销观念2现代市场营销观念 10生产观念：消费者总是接受任何他能买到并且买得起的产品。因此，企业应集中精力提高生产效率和扩大分销范围，以便增加产量，降低成本。背景：供不应求；适应条件：供不应求，同质性产品；缺陷：重生产，轻市场；核心：提高生产率，降低成本。 11产品观念：消费者最喜欢高质量,多功能和具有某些特色的产品。因此，企业管理的中心是致力生产优质产品，并不断精益求精。背景：供需基本平衡;适应条件：搞收入群体，奢侈品，易察觉;缺陷：营销近视症—在市场营销管理中缺乏远见，只看到自己产品好，看不到市场的需求在变化，致使企业经营陷入困境；核心：产品质量提高，品牌意识出现。 12推销观念：消费者通常有一种购买惰性或抗衡心理，若听其自然，消费者就不会大量购买本企业的产品，因而营销管理的中心是积极推销和大力促销。背景：供过于求；适应条件：非需求品；核心：推销工具和方法哪种最有效；缺陷：盲目扩大生产，产品积压更严重，虚假广告宣传，引起社会不良反应。 13市场营销观念：企业的一切计划与策略应以消费者为中心，正确确定目标市场的需要与欲望，比竞争者更有效地满足顾客需求。背景：确定目标市场的需求和欲望；核心：以消费者为中心，调研；缺陷：客观社会环境，过度关注消费者需求，丧失生产主动性。 14社会营销观念：企业和组织应该确定目标市场的需要，欲望和利益，然后向顾客提供超值产品和服务，以维护与增进顾客和社会的福利。是对市场营销观念的补充与修正。核心：考查社会的需求，节约资源，减少环境污染。 15市场调研：系统的设计，手机，分析和提出数据资料，一级提出跟公司所面临的特定的营销状况有关的调查研究结构。 16调研的步骤：提出问题，确定目标；制定调研计划；收集信息；分析信息；提出市场调研报告，确定最佳方案。调研实务：1调研对象的方法：a询问法：1访谈法 2 邮寄调查法3电话调查法。B观察法c实验法。2选择调研工具：问卷调查结构：标题、调差问卷说明、被调查者基本情况、调查问卷的内容、编码、调查情况统计。 17市场营销环境：影响企业市场营销活动和营销目标实现的各种因素和条件。宏观环境：一个国家或地区的自然、政治、法律、人口、经济、社会文化、科学技术等能够影响企业营销活动的宏观因素。微观环境：企业内部条件、企业的顾客、竞争者、营销渠道和有关公众等对企业营销活动有直接影响的因素。 18市场分析的方法：1市场机会矩阵图2产品/市场发展分析矩阵3市场吸引力/企业优势分析矩阵。 19企业环境威胁对策：反攻策略：试着限制或扭转不利因素的发展；减轻策略：通过企业改变营销策略，以‘减轻环境威胁’的环境；转移策略：将产品转移到其他市场或他赢利更多的产品行业。营销信息系统：包括内部报警系统、营销情报系统、营销调研系统、营销分析系统。

植物细胞实验 1.实验室器具洗涤的工艺流程是什么？洗净的判定标准是么？（1）浸泡——刷——冲洗——涮洗（蒸馏水）——干燥——存放（2）干燥和洁 .2.无菌室及培养室的日常维护方法（1）启用时清洁卫生擦拭无尘（2）定期不定期给予紫外线照射，来苏尔拖地，巴氏消毒液喷雾，氧乙酸消毒 3.外植体消毒的一般程序（菊花、银杏、马铃薯三选一.菊花幼苗（银杏种子）——摘除叶片（剥去壳质中的种皮）——流水冲洗30min——装入消毒瓶中——接种台——75%酒精泡30s倒掉——0.1%升汞泡8-12min（升汞倒入回收瓶）——无菌水3-5遍马铃薯芽段－－75％酒精－－无菌水冲洗－－0.1%升汞泡５－８ｍｉｎ－－无菌水３－５遍 4. 简述无菌操作的技术要点(1)杀死规定作业系统（如试管三角瓶培养皿）中的一切微生物，保证无菌(2)作业系统和外界联系之间隔绝一切微生物穿过(用火焰封闭三角瓶和试管的开口，用棉花过滤空气，过滤器过滤水等)(3)在无菌室超净工作台或空气流通较小的环境中接种或者在无法避免的敞开作业中避免不需要的微生物侵入作业系统 5. 简述高压灭菌锅的使用方法。（1）首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。（2)放回灭菌桶，预热后并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。（3）加盖，再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。（4）打开电源和开关，加热，让压力达到0.05Mpa时打开排气阀，排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源开关，维持压力记时。121-126℃，20分钟灭菌。（5）灭菌所需时间到后，切断电源让灭菌锅内温度自然下降，（6）取出的灭菌物 6. 简述污染率、枯死率和诱导率的计算方法。污染率=污染/总的接种数枯死率=枯死/未污染数诱导率=分化出的/未污染的愈伤 7. 请写出MS基本培养基的母液MSⅠ的配置步骤7大量元素无机盐硝酸铵，硝酸钾，磷酸二氢钾，硫酸镁和氯化钙按规定的量扩大20倍称取，分别溶解后混合定容到10000m 8. 银杏愈伤组织提取黄酮的操作要点。取出愈伤组织-65摄氏度烘干48h磨成粉末 -干粉中加入甲醇-超声-水浴破碎30min-过滤收集滤液-加入Hcl-80水浴回流 9.菊花快繁实验中，在进行生根培养时，为什么要选择1/2MS作为基本培养基？降低无机盐的浓度从而使渗透压降低提高水势促进芽吸水，反而促进生根 10.简述植物细胞工程实验室里马铃薯脱毒的方法及原理。原理：（1）热处理在一定范围内，用高于常温处理可部分或完全钝化植物组织中的某些病毒，而不伤及植物本身（2）茎尖培养病毒在植物体内分布不均，根尖茎尖部分病毒含量极低或无病毒，以茎尖作为外植体能获得脱毒植株，供繁种生产使用脱毒方法：茎尖培养结合热处理---将适宜的母株或由块茎萌发的带芽块茎于适当的高温30-38处理数周后，切取顶芽或侧芽，作为茎尖剥离材料于无菌条件下剥离茎尖（带1-3个叶原基的顶端分生组织）接种于适宜的培养基上，诱导茎尖分化成苗，扩增，培养种薯即得原原种，扩繁后制得生产中用于生产 11.简述配方1/2MS+NAA0.1+蔗糖3%+琼脂0.7%，pH5.8的含义及配1L的制备方法。 (1)Ms1减半:25ml Ms2-5 :2.5ml(实际中不减半5ml)其余物质均不减如 NAA1ml 蔗糖30gq琼脂7g pH5.8（2）白色搪瓷杯取蒸馏水700ml煮至冒白气，加入7g琼脂搅拌至融化后再加入30g蔗糖溶解，用移液管分别量取（1）调节pH5.8定容至1L 12.简述配500ml MS+BA0.5+NAA0.2+蔗糖3%+琼脂0.7%，pH5.8的过程。

下午谁的山寨，让我膜拜下～哥们儿好虎，山寨的那部分和忘语写的惊人相似啊，莫非有内幕？

关于中石油貌似很多人搞错点什么吧？？貌似中石油是中国的，他向日本捐油需要折合人民币，但是四川地震油也是中石油的吧？不管是运输车，飞机，还是救援车，如果严格算这也是救援物资吧？难道这些还要折合吗？如果折合了能是几亿能买到的吗？各位上来开喷的莫非把中国分成几个了？如果大家觉得有理就思考下，不要人云亦云，看着不爽的各位“爱国志士”，请先报一下你除了上网喷人做了什么助人为乐的事？觉得有理就帮转下？讨厌天天进个贴吧还总看到莫名其妙的“爱国”贴

关于中石油貌似很多人搞错点什么吧？貌似中石油是中国的，他向日本捐油需要折合人民币，但是四川地震油也是中石油的吧？不管是运输车，飞机，还是救援车，如果严格算这也是救援物资吧？难道这些还要折合吗？如果折合了能是几亿能买到的吗？各位上来开喷的莫非把中国分成几个了？如果大家觉得有理就思考下，不要人云亦云，看着不爽的各位“爱国志士”，请先报一下你除了上网喷人做了什么助人为乐的事？觉得有理就帮转下？讨厌天天进个贴吧还总看到莫名其妙的“爱国”贴

关于中石油貌似很多人搞错点什么貌似中石油是中国的，他向日本捐油需要折合人民币，但是四川地震油也是中石油的吧？不管是运输车，飞机，还是救援车，如果严格算这也是救援物资吧？难道这些还要折合吗？如果折合了能是几亿能买到的吗？各位上来开喷的莫非把中国分成几个了？如果大家觉得有理就思考下，不要人云亦云，看着不爽的各位“爱国志士”，请先报一下你除了上网喷人做了什么助人为乐的事？觉得有理就帮转下？讨厌天天进个贴吧还总看到莫名其妙的“爱国”贴

猥琐还有什么东西没用啊？咱们讨论下他还要用什么解决这三个人吧？第一个噬心虫第二个黑色小刀，还有啥压箱底的吗？

更新没？同志们帮忙啊，手机低端不能上纵横如题

感觉烈焰会是因为莲子都给人而死… 然后如莲花一般重生如题

最后一集被雷到吐血了伊卡洛斯爆发版智树柔情版伊卡洛斯的战斗越看越像基神附身EXIA爆格看到最后一秒更是猛然发现伊卡洛斯弄出来的飞船只是出来了后半部分！！！要是正面的主炮估计宇宙就要重新开始了吧。。。。。原来第一集里智树的愿望真的实现了成为世界霸主。。。。。。宇宙霸主都没问题。。。。雷声阵阵不过还是期待下一季会有第二季吧？？？阿拉法伽马都出来了还差贝塔吧

问个小艾的事小艾会变雅典娜？？片头曲的对决会出现吗？？？17集了啊一共就出现两次一次遗迹一次手恢复显出来小艾不是常人这也“太紧凑了”吧。。。

伊萨拉真的领便当了？？？不会吧？？？击中的是右下方啊？？那个地方会重伤但不会挂吧？？？而且预告里也没有悲伤的只有愤怒的还有个高兴的镜头会不会是送医院了？？？那个白痴指挥官是来说风凉话被罗洁臭扁？？？？？会是这样的剧情吗？？？？

找摄影爱好者帮个忙想请大家帮我拍几张关于西园和三号教学楼好的照片最好是没有人物的正面的越美越好角度最好不要仰视太严重远景也可以只要能突出建筑就好有的话请帮忙发到我邮箱里 [email protected] 我没有什么能表示感谢的报酬只能说谢谢了有的话请在清明节前给我发下再次谢谢了

哪位高手告诉下我为什么进不去？？？？？游戏区选择界面我总是显示正在接受游戏大区信息，请等待半天都是这个选不了区进不了游戏这是怎么回事怎么办？？？？？？？？？？？？

本人08届天津学生学习生物技术想咨询下学校情况最好谁能给我发个宿舍的简图还有学校的勤工俭学都有什么要求？？？？？请学长告诉下还有生物技术的学习难吗传说都是男生真的吗？？？