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尿激酶 尿激酶粗品生产工艺 尿激酶的特性和加工方法 尿激酶是一种碱性蛋白酶,由肾脏产生,主要存在于人体及哺乳动物的尿液中,血液凝固时人体的正常机能,但是某些病理状态下,在血管内形成血酸,堵塞血液流通时就会造成严重后果,尿激酶是溶血栓药物,但它并不直接用于血块本身,而是首先激活体内的纤溶酶脘,成为有活性的纤溶酶,纤溶酶作用于纤维蛋白酶凝块, 使其分解成可溶性多碳。 尿激酶由多种分子量形式,高分子量的尿激酶溶解血栓临床效果要比低分子量的约高一倍,因此,国际上把尿激酶的分子量作为质量标准的检查项目之一,为减低分子量的产生,生产过程中PH值不宜太低。 尿激酶在冻干状态下可稳定数年,1mg/ml的无菌溶液可以在冰消中保存数月,在盐浓度低于0.03M NaCl时稳定性下降,在极低的盐浓度时,随着酶的失活产生沉淀,人血蛋白或明胶可防止酶的表面变性作用。 由于尿激酶有着重要的医药价值,所以相继有很多专刊报道了尿激酶粗品的提取方法,因人体尿液中尿激酶含量很低,取尿激酶的主要关键就是如何从大量的尿液中富集尿激酶,从目前发表的专刊来看,主要有三类方法:(1)、发泡法:即以高速搅拌使酶液发泡,然后使泡沫液化,加入硫酸铵使尿激酶沉淀。(2)、沉淀剂法:在尿液中加入沉淀剂,使尿激酶沉淀,尿激酶则保留在沉淀中,(3)、吸附剂,此法应用最多,选择适当的吸附剂,有选择的吸附尿激酶。本工艺就采用离子交换树脂做吸附剂,生产尿激酶粗品。 操作程序 1、 收集尿液:用特制塑料桶手机男性尿,尿液的新鲜程度与收率和质量关系甚大。尿中蛋白酶在酸性条件下降解尿激酶,血尿和女性尿中含有血红细胞等成分,影响尿激酶的收率和质量,故只用男性尿作原料。尿液最好保存在10℃以下尽快处理。迅速降温(可以用冰或其它方法降温),用5N的NaOH调尿液PH值为9,静置1小时,虹吸上清液,丢弃灰白色的沉淀。 2、 吸附尿激酶:将虹吸的上清液用5N盐酸(HCl)调PH至5.8-6,加1%(W/V)树脂,搅拌吸附1小时,停止搅拌,树脂自然下沉,虹吸,去掉残留尿液,收集树脂。 3、 水洗和洗净:把收集的树脂用自来水洗三遍,然后用无离子水再洗三遍,至尿液无色为止,以0.1M PH6.4 磷酸钠缓冲液(10%体积)搅拌洗净30分,虹吸, 去掉上清液。 4、 洗脱:第一次洗脱,用2% NH4OH和1M NaCl洗脱
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